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關(guān)于間充質(zhì)

干細(xì)胞三系誘導(dǎo)染色分析

一、MSC三系誘導(dǎo)基本介紹

干細(xì)胞是一種未充分分化、尚不成熟的細(xì)胞，在適當(dāng)條件下，具有再生各種組織、器官的潛能，因此被寄予厚望，干細(xì)胞研究也多次進(jìn)入國(guó)自然研究熱點(diǎn)排行榜。間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）具有多向分化的潛能，體外在一定條件下可以誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞，2006年國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)（ISCT）確定此三項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)是MSC鑒定的必檢項(xiàng)目，MSC的三系誘導(dǎo)在生物醫(yī)藥領(lǐng)域一直深受各位科研人員的青睞和應(yīng)用。

二、MSC三系分化檢測(cè)手段

“成脂分化"

間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化有兩個(gè)階段，先是MSC分化為脂肪前體細(xì)胞，接著在特定的細(xì)胞刺激影響下（如C/EBPs和PPAR-γ）最終分化為脂肪細(xì)胞，出現(xiàn)脂肪細(xì)胞中顯著的標(biāo)志物（脂肪滴）。對(duì)于脂滴染色，經(jīng)常采用油紅O染色方法對(duì)脂滴進(jìn)行染色，其原理為油紅O可進(jìn)入脂滴與其特異性結(jié)合將其染成紅色。我司有多款油紅O染色試劑盒，分別適配于組織和細(xì)胞樣本，用于細(xì)胞染色常推薦G1262，染色后結(jié)果可通過(guò)圖像處理軟件進(jìn)行分析，如果想用于后續(xù)定量分析，可以染色后用無(wú)水異丙醇或乙醇浸泡細(xì)胞3-5min進(jìn)行顏色提取，用離心管收集溶出的溶液，分取1ml稀釋一定倍數(shù)進(jìn)行紫外分光光度法測(cè)量520nm處的OD值。除此之外我們還擁有熒光法試劑盒（內(nèi)含核染料）用于脂滴染色，結(jié)果對(duì)比清晰，染色靈敏。

染色示例

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“成骨分化"

MSC成骨分化分為兩個(gè)時(shí)期，誘導(dǎo)初期會(huì)有堿性磷酸酶（ALP）的高度表達(dá)，作為成骨細(xì)胞分化成熟的早期標(biāo)志，可通過(guò)固藍(lán)染色來(lái)鑒別。誘導(dǎo)后期，成熟的成骨細(xì)胞表達(dá)ECM鈣化相關(guān)蛋白，長(zhǎng)時(shí)間的成骨誘導(dǎo)使鈣離子以鈣鹽方式沉淀下來(lái)，形成“骨結(jié)節(jié)"。骨結(jié)節(jié)可通過(guò)茜素紅S染色（茜素紅和鈣發(fā)生顯色反應(yīng)），把外面沉積的鈣結(jié)節(jié)染成深紅色，通過(guò)著色物面積和深淺來(lái)表示成骨分化的強(qiáng)弱。

對(duì)于茜素紅染色，我們2024年上新了可以提取鈣鹽染色的輔助試劑-CPC（G1453），以及染色劑+提取劑的試劑盒套裝（G3283），在完成茜素紅染色后，加入提取試劑室溫孵育15-30min使茜素紅染色充分溶解，用離心管收集溶出的溶液，分取100ul或200ul置于96孔板條內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)量560nm處的OD值，從而半定量鈣鹽含量。

染色示例

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“成軟骨分化"

MSC成軟骨分化可分為兩個(gè)時(shí)期，首先MSC聚集成團(tuán)，成團(tuán)的中間細(xì)胞經(jīng)分裂分化轉(zhuǎn)變成一種大而圓的細(xì)胞，即成軟骨細(xì)胞。然后成軟骨細(xì)胞繼續(xù)分化產(chǎn)生基質(zhì)和纖維，不斷交織形成軟骨球狀，可通過(guò)阿利新藍(lán)來(lái)進(jìn)行鑒別染色，阿利新藍(lán)與軟骨基質(zhì)中的多糖結(jié)合，使軟骨細(xì)胞和基質(zhì)呈淺藍(lán)色或藍(lán)綠色。若想對(duì)軟骨含量定量分析，可以使用G1567-阿利新藍(lán)染色提取試劑在阿利新藍(lán)染色后進(jìn)行溶解提取顏色，室溫孵育1-2h即可，用離心管收集溶出的溶液，分取100μL或200μL置于96孔板條內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)量620nm處的OD值，從而達(dá)到半定量軟骨含量目的。

染色示例

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